ホレイショ・ケイン

（デヴィッド・カルーソ）

声の出演：石塚運昇

拳銃片手に疾走するタフガイ。マイアミCSI：のチーフ。マイアミ出身で、マイアミ警察爆弾処理班を経てCSI：へ。キューバ人の母親が麻薬の売人に殺害され、潜入捜査官をしていた弟が殉職するという経験から悪を憎む気持ちが強い。CSI：中でいちばんの行動派で、名ゼリフも多い。

カリー・デュケーン

（エミリー・プロクター）

声の出演：宮島依里

弾道オタクのブロンド美女。愛称は弾丸ガール。保安官だった父から銃の扱いと正義の大切さを学び警察へ。弾道分析や火気銃器の知識が豊富。

ティム・スピードル

（ロリー・コクレーン）

声の出演：竹田雅則

緻密な分析が得意の実力派。足跡の分析が専門分野。高校時代に死んだ親友に恥じないようにという気持ちから仕事に熱中。元フットボール部｡

エリック・デルコ

（アダム・ロドリゲス）

声の出演：竹若拓磨

水泳が特技の陽気な捜査官。ロシア人の父とキューバ人の母を持ち、人の役に立つ仕事がしたいという気持ちから警察へ。

イェリーナ・サラス

（ソフィア・ミロス）

声の出演：蓬莱照子

マイアミデイド警察殺人課刑事。ホレイショの弟の刑事レイモンド・ケインの妻であり、ホレイショにとっては義理の妹。レイモンドとの間に息子がいる。

アレックス・ウッズ

（カンディ・アレキサンダー）

声の出演：弥永和子

マイアミデイド警察検死官。ニューヨークで開業医を営んでいたが事件により解雇され、検死官となりマイアミへ移って来た。既婚者であり、一男一女の母。クールで腕利き。

ライアン・ウルフ

（ジョナサン・トーゴ）

声の出演：浪川大輔

パトロール警官の時に遺伝学の修士号を取得した野心家。チーム内で誤解を受けることもあるが、誰よりも仲間の危機を救っている。

ナタリア・ボア・ヴィスタ

（エヴァ・ラルー）

声の出演：藤貴子

DNA分析のエキスパート。FBIのスパイとしてCSI：に潜入していたが、後にチームへ加わる。元夫から家庭内暴力を受けていたため、女性への暴力を強く憎んでいる。

フランク・トリップ

（レックス・リン）

声の出演：辻親八

マイアミ・デイド郡警察・殺人課所属。CSI：と共同で現場捜査や尋問にあたる。有無を言わせぬ威圧感で犯人を圧倒するが、美人には弱い一面も。